选修一     微生物的实验室培养

一、学习目标：

1.了解有关培养基的基础知识，掌握无菌操作技术的有关内容。

2.了解消毒和灭菌常用的方法及二者的区别。

3.学会以大肠杆菌为材料进行微生物培养与分离纯化的方法。

二、自主学习

   （一）、培养基

1．概念：培养基是指                                                            。

2.培养基的种类

3．营养构成：各种培养基一般都含有      、       、       和        ，此外还要满足微生物生长对     、               以及       的要求。

4．培养乳酸杆菌时需在培养基中添加        、培养霉菌时需将培养基PH调至       、培养细菌时需将PH调至                、培养厌氧微生物则需提供         条件。

【补充1】碳源：如CO2、糖类、脂肪酸等有机物，构成微生物的结构物质和分泌物，并提供能量。

氮源：如N2、氨盐、硝酸盐、牛肉膏、蛋白胨等，主要用来合成蛋白质、核酸及含氮代谢物等。含有C、H、O、N的化合物既可以作为碳源，又可以作为氮源，如氨基酸等。[来源:Zxxk.Com]

 （二）、无菌技术：讨论回答下列问题：

1.概念：防止一切外来杂菌的侵入，并保持灭菌物品及无菌区域不再被污染的方法，称为无菌技术。

2、获得纯净培养物的关键是                                ，具体操作如下：[来源:Z。xx。k.Com]

（1）．对 实验操作的      、操作者的      和       进行                。

（ 2）．将用于微生物培养的        、          和          等器具进行          。

（3）．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在              附近进行。

（4）．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与            相接触。

3、消毒和灭菌

（1）．消毒是指                                                              。常用的方法有           、            、            消毒法。

（2）．灭菌是指                                                               。常用的方法有：                 、                、             灭菌。分别适用于那些用具？

4、消毒与灭菌的常用方法

实验操作----大肠杆菌的纯化培养

一、学习目标：

1.了解有关培养基的基础知识，掌握无菌操作技术的有关内容。

2.了解消毒和灭菌常用的方法及二者的区别。

3.学会以大肠杆菌为材料进行微生物培养与分离纯化的方法。

二、自主学习 （一）、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基[来源:学科网ZXXK]

   1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作步骤是：        、        、          、        、        。

〖思考1〗在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的称量操作中，动作要迅速，原因是什么？

[来源:Z*xx*k.Com]

溶化操作中需要不断用玻璃棒搅拌的目的是什么？

〖思考2〗牛肉膏和蛋白胨主要为微生物提供什么等营养物质？

2、倒平板：待培养基冷却至     ℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：

①在火焰旁右手拿                ，左手               ；

②使锥形瓶的瓶口                       ；

③左手将培养皿            ，右手                 ，立刻盖上皿盖。

④待平板冷却凝固后，将平板                     。

〖思考3〗锥形瓶的瓶口通过火焰的目的是什么？

〖思考4〗倒平板的目的是什么？

〖思考5〗若皿盖和皿底之间粘有培养基，则该平板能否培养微生物？为什么？

〖思考6〗配制斜面培养基作用是什么？，试管为什么要加塞棉塞？

（二）、纯化大肠杆菌

 微生物接种：最常用的是             法和                 法。另外还有穿刺接种和斜面接种等。

    1．平板划线法是                                                   的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

其操作步骤是：

①将          在酒精灯火焰上灼烧直至         。

②在酒精灯火焰旁冷却接种环，并打开大肠杆菌的菌种试管的棉塞。

③将菌种试管口通过火焰达到                  的目的。

④将冷却的接种环伸入到                         。 ⑤将菌种试管口再次通过火焰后塞上棉塞。

⑥将皿盖打开一条缝隙，把接种环                         ，盖上皿盖，不要划破培养基。

⑦灼烧接种环，冷却后从                                 划线。重复上述过程，完成三、四、五区域内划线。注意不要将                              相连。

⑧将平板                           培养。

〖思考7〗取菌种前灼烧接种环的目的是什么？

为什么除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环？

取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是？

最后灼烧接种环的目的是？                                   

在第1次划线后都从上次划线末端开始的目的是？                                   

2．稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将                         进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得单个细菌形成的标准菌落。

　系列稀释操作：

①取盛有      mL水的无菌试管6支         ，编号101、102、103、104、105、106。

②用灼烧冷却的移液管吸取    mL菌液注入编号为101试管中，并吹打3次使之混匀。

③从101倍液中吸取       mL菌液注入到编号为102试管内吹打均匀，获得102倍液。依此类推。

结果分析与评价

1、  培养未接种培养基的作用是什么？，若有菌落形成，说明什么？

2、  在肉汤培养基上，大肠杆菌菌落颜色？形态？

（三）、细菌培养基的配制

 （1）                        是常用的细菌基础培养基。

 （2）配制过程：                   、                 、               、

                     、               和                   。

 （3）配制培养液：在200ml烧杯中加入100ml蒸馏水，再加入0.5g            、

     1g           、0.5g NaCl、1g 琼脂，边加水边          ，配制成培养基。

（4）细菌培养基PH应调至            。分装时约为试管高度的             。

                         是常用的灭菌方法。温度为               ，气压为

                ，灭菌        分钟。搁置斜面，长度不超过试管总长的      。